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l本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中大鼠低氧诱导因子-1α（HIF-1α）的含量。

l有效期：6个月

l保存条件：2-8℃

l本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被大鼠低氧诱导因子-1α（HIF-1α）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠低氧诱导因子-1α（HIF-1α）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样本处理及要求

1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4.细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

标本处理

1. 本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。

2. 实验前应预测标本含量，如果标本浓度过高，应对标本进行稀释，使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。标本使用0.01mol/L的PBS稀释(PH=7.0-7.2)。

3. 若所检样本不包含在说明书所列样本之中，建议进行预实验验证其有效性，并注意留存样本。

4. 使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。

5. 若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素较多，如：细胞状态、细胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的情况。

6. 某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配，而不被检测出。

7. 建议使用新鲜样本，保存时间过长可能会存在蛋白降解或变性导致实验结果偏差。

需要而未提供的试剂和器材

1.酶标仪（450nm）

2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

4.蒸馏水或去离子水

试剂盒组成

名称

96孔配置

48孔配置

备注

微孔酶标板

8孔×12条

8孔×6条

无

标准品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

无

样本稀释液

6mL

3mL

无

检测抗体-HRP

10mL

5mL

无

20×洗涤缓冲液

25mL

15mL

按说明书进行稀释

底物A

6mL

3mL

无

底物B

6mL

3mL

无

终止液

6mL

3mL

无

封板膜